一、支原体特点1、支原体是细胞外生存的最小微生物,大小一般在0.3~0.5um之间,无细胞壁、不能维持固定的形态而呈现多形性。因此对影响细胞壁合成的抗生素不敏感,如青霉素等。2、不同于细菌,也不同于病毒,种类繁多、分布广泛、造成的危害相当大,涉及人、动物、植物及等多个领域,给人类健康和科研工作带来不利影响。
3、对热抵抗力差,通常55℃经15分钟处理可使之灭活。据国外文献报道,支原体在离开宿体15分钟左右死亡。
4.繁殖所需物质特殊,所以许多培养基培养时间长。因此更适合支原体繁殖的物质及配合比例就显得尤为重要,同时也是不同培养基的主要技术区别所在。
二、支原体的分类:自然界目前已经发现的有多种;致病支原体中,肺炎支原体起肺炎,人型支原体、解脲支原体和生殖器支原体主要泌尿生殖道感染。支原体肺炎又称原发性非典型肺炎,支原体肺炎全年均可发病,以冬季多见,可有小流行。支原体脑炎是学龄前儿童及青年人常见的一种肺炎,支原体肺炎主要通过飞沫传播,潜伏期较长,可达2~3周。生殖器支原体感染是近年新明确的一种性接触传播疾病。成人主要通过性接触传播,新生儿则由母亲生殖道分娩时感染。成人男性的感染部位在尿道粘膜,女性感染部位在宫颈。新生儿主要引起结膜炎和肺炎。
三、肺炎支原体致病特点:
1.通过呼吸道飞沫传染,可散发流行;
2.全年均可发病;
3.由支原体引起的感冒占整个感冒20%-40%,支原体肺炎的发病率可占所有肺炎病例的30%-40%。发病率占小儿肺炎的20﹪左右;
4.起病缓慢,潜伏期2~3周,病初有全身不适,乏力、头痛。2~3天后出现发热体温常达39℃左右,可持续1~3周,可伴有咽痛和肌肉酸痛;
5.肺炎支原体感染除能引起呼吸道病变外,还能引起心肌炎、肝炎、关节炎、肾炎、脑膜炎、溶血性贫血、血小板减少性紫癜等呼吸系统以外的疾病。因此,必须予以重视;
6.发病前2~3天直至病愈数周,皆可在呼吸道分泌物中发现肺炎支原体。
四、不同病原体感染的检测与治疗
·细菌感染:可通过检查血常规,测定白细胞,中性粒细胞高低来判断。用药:头孢类,青霉素类抗生素。
·病毒感染:通过血常规,测定淋巴细胞高低来判断。用药:无特效药,用解热镇痛来缓解,靠免疫力。
·肺炎支原体感染:用药时首选大环内酯类抗生素(破坏细胞中蛋白质合成)
五、支原体几种检测方法对比
1.血清学检测(抗体检测):
a.常用于检测抗体,患者由于时间问题未产生抗体时,医生靠经验用药,3天后,如无缓解再测抗体,检测阳性后换药治疗,或联合用药。增加患者负担,造成滥用抗生素。
b.抽血检测患者痛苦,易造成交叉感染。操作时采样、血清离心等步骤繁杂费时费力。
c.从人感染支原体到体内产生抗体需要5~7天,且治愈后抗体在体内衰退仍需1~3月。所以说无论什么时间做抗体检测结果都不准确。
2.金标法:
金标法查抗体不能做早期诊断,阳性结果如血清学检测也不能判定为当次感染,相比培养法欠缺灵敏性、准确性。
3.传统培养法:
直接查患者体内病原体,准确率高,但所需时间长(约48~72小时)
4.瑞凯培养法:
a.准确率高,发病当时就能查到。而金标法查抗体不能做早期诊断,阳性结果不能判定为当次感染。
b.相比PCR法操作简便,且不需昂贵的附加设备及专业操作人员。
c.直接提取患者咽部分泌物查病原体,无需采血,减少患者痛苦及恐惧心理。
d.肺炎支原体药敏检测培养基可根据药敏试验结果,指导正确用药。避免滥用抗生素,减少患者负担。
e.培养时间短,8-12小时报结果。
六、瑞凯培养法:
(一)、肺炎型支原体检测培养基
肺炎型支原体检测培养基是一种利于肺炎支原体生长的条件培养基,培养基内含有葡萄糖、酚红等。肺炎型支原体在培养基中生长增殖时,分解葡萄糖产生氢离子,使培养基的pH值降低,培养基内的酚红指示剂从红变成淡黄色,从而被检出。
该产品系由基础培养基、小牛血清、酵母粉、葡萄糖、酚红与青霉素等按一定比例混合而成。
在-4℃~-15℃下贮存,有效期为两年。在18℃~25℃下,有效期为5天。
37℃恒温培养箱或37℃恒温水浴锅。
样本取到后要立即接种到培养基内。
检测方法:
1、培养基解冻:将培养基从-4℃~-15℃贮存的冰箱中取出,置室温下,让其解冻,恢复液体形态。2、取样:用无菌的棉拭子在口腔咽部捻转数次,取出棉拭子。A.棉拭子浸润生理盐水后并挤压出棉拭子液体再采样效果更佳;
B.在口腔咽部捻转数次,粘取尽量多的分泌液;
3、培养:打开培养基瓶盖,将棉拭子置于瓶内,搅动棉拭子数次,对着瓶壁尽量挤压出其中液体,取出棉拭子弃之(或将棉拭子剪断使其采样部分留在瓶内,将尾部弃之),盖上瓶盖,置37℃恒温培养箱中培养12小时后观察结果。
4、结果判断:典型阳性和阴性结果的判断:A.培养基保持原来的红色至桔红色为阴性;
B.培养基变成浅黄色为阳性(二)肺炎型支原体药敏检测培养基
该产品由肺炎型支原体检测培养基和药敏试验板组成。
可在检测肺炎支原体的同时,对肺炎支原体进行药物敏感试验。可进一步了解患者本人、本次所感染支原体对各种药物的敏感(或耐受)程度,以指导临床合理选用药物。
在-4℃~-15℃下贮存,有效期为两年。
在18℃~25℃下,有效期为5天。
37℃恒温培养箱或37℃恒温水浴锅。
样本取到后要立即接种到培养基内。
工作原理
肺炎型支原体药敏检测培养基在肺炎支原体检测培养基的基础上增加了药敏试验板。其中培养基的原理和单培养原理相同,而药敏板主体是24孔培养板,从1~11号孔分别包被有不同种类的药物,每一号分A、B两孔,分别包被同一种药物不同浓度的药量,A孔为低浓度药量,B孔为高浓度药量。第12号的A、B两孔不包被药物,用作检测对照孔。
培养基接种样本后,分别加到药敏板培养孔内。利用肺炎支原体对各种药物的敏感(或耐受)程度不同,使其孔内pH值变化对颜色的影响从而读取药敏试验结果。检测方法:
1.将已解冻但未加入样本的培养基滴加50ul到药敏板A12孔(阴性对照孔),再加50ul石蜡油封盖以防止液体挥发。
2.用无菌棉拭子(或咽拭子)在口腔咽部捻转数次,取出棉拭子置于培养瓶内,搅动数次,对着瓶壁尽量挤压出其中液体(或将棉拭子剪断使其采样部分留在瓶内,将尾部弃之)。
3.用移液器将接种后的培养基分别滴加到药敏试验板除A12孔(阴性对照孔)外的其他23个小孔内,每孔50ul,然后每孔再加50ul的液体石蜡。
4.将药敏板连同培养瓶内剩余培养基放置37℃恒温箱培养12小时。
结果判断:
1.阳性判断:
A:首先观察药敏板的A12号孔,里面的培养基应保持原来的红色,如果变黄则表明操作
过程可能出现问题,建议放弃本次试验。
B:培养基瓶内和药敏板的B12号孔保持原来的红色至桔红色为阴性,变成浅黄色为阳性。
2.药敏判断:当标本判定阳性后再分别观察1~11号孔,如果A、B两孔均呈黄色说明肺炎支原体对该抗生素耐药。A孔呈黄色,B孔保持红色,则是中度敏感;如果A、B两孔均保持原来的红色则肺炎支原体对该抗生素敏感。七、检测注意事项
1.培养液在-4℃至-15℃冷冻保存,室温下待融化后使用,尽量不要使其反复解冻。
2.肺炎支原体检测取样前应嘱患者用清水漱口(避免酸性物质、食物残渣残等的残留),在漱口10分钟后再进行取样。
3.做到取样位置准确,取样量足。
4.取样后应在10分钟内接种到培养基里。
5.支原体最适生长温度为37℃,所以培养基接种样本后,要放到37℃恒温培养箱或恒温水浴锅中培养,温度要调至37℃±1℃。
6.由于支原体在繁殖的过程中会产生白色沉淀,因此从恒温箱中取出培养基判定结果时,注意持稳培养基瓶,勿摇晃瓶体以免影响到结果判断。
7.检测全过程中,应遵循处理传染性物质和化学试剂操作的通用规范。处理标本时应戴上一次性手套。
8.丢弃污染性废物(包括棉拭子、用过试剂)应做潜在的传染原处理。
八、产品特点
1.不上药事会,开发容易,上量快;
2.空间巨大,长线品种;
3.国内原研,独家专利;
4.医保甲类项目,减轻患者负担;
5.产品质量稳定,有效期两年,而其他生物制剂均为一年;
6.针对呼吸及泌尿生殖系统筛查,患者群多,用量大;
7.适合各级医疗机构开展
九、产品应用范围
肺炎型支原体检测培养基及肺炎型支原体药敏检测培养基应用科室有呼吸科,儿科等。
十、价格参考
十一、问题解答
Q.采样后,棉拭子能放置多久?
A.建议采样后立即将咽拭子放入培养基内,据国外文献报道,支原体离开宿主后会很快死亡(15分钟以内)。另外这样也避免了污染其他杂菌的可能。(门诊的使用)
Q.培养基能否快速解冻?
A.可以。科室可以根据当天的大概用量,早上事先放置于37℃的恒温箱里快速解冻。
Q.当天解冻了,没有用完的培养基,能再冻起来吗?
A.尽量不要将培养基反复冻融。但是您可以把它冷藏起来,明天继续用。培养基在冷藏环境下至少可以保存一周。
Q.如果培养结果偶尔出现浑浊、沉淀或者半红半黄的情况,应该如何判断?
A.出现这样的情况全部判断为阴性。培养基内发生的这种变化不是由于存在支原体引起的,可能是因为患者口腔内的食物残留或者其他口腔杂菌引起的。培养基特异性极强,只有支原体能在其中快速生长繁殖,而其他微生物的代谢和酸性物质不敏感,才会出现以上情况。(建议再次检查)
Q.试剂的准确率如何?
A.经临床对比验证,我们的培养基检验结果的准确率达到了98﹪以上。菌株试验%准确。
Q.标本量是否对结果有影响?
A.医院的使用结果上看,标本量对培养时间有一定的影响,如果没有达到足够的标本量(即采取的咽部分泌物量),就可能无法在12小时内检出阳性,但12小时后仍可能出现阳性。所以采集时尽可能取足标本。
Q.口内微量的支原体是否会导致结果阳性?
A.不会!当咽部提取的分泌物内支原体量没有达到—时(也就是没有达到肺炎支原体的发病基数)
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